李世明，胡燕杰，张丽
(内蒙古维克生生物技术股份有限公司，内蒙古 呼和浩特 010109)
近些年来，随着各类动物疾病的发病率不断提高，诸如禽流感、布氏杆菌病、口蹄疫、非洲猪瘟等疫病，这对动物的健康构成了严重威胁，在此背景下，也使畜牧业受到不小的经济损失。因此，加强对动物重大疫病的预防和管控已经势在必行，制备相应的动物血清属于开展实验室诊断的基础，以新生牛血清为例，其属于动物疫苗生产期间细胞培养基中的重要成分，只有添加相应比例的血清成分，才能够为细胞生长提供所需的激素及生长因子[1]。现阶段，市场上使用的新生牛血清产品较为繁多，总体上具有质量差异大、来源广泛、检验方式落后等问题，对后续动物疫苗的生产带来不利影响，这也导致新生牛血清的应用效果、动物来源的安全性存在隐患。因此，探讨强化对动物血清制备的质量控制极为关键。
牛血清采自新鲜的牛血液，在经过自然层析、离心后可得到去除了血细胞、纤维蛋白的淡黄色透明的上清液。上清液的这种制作方式主要目的是提供基本营养物质、激素和各种生长因子、结合蛋白、促接触和伸展因子，使细胞贴壁免受机械损伤，对培养中的细胞起到某些保护作用。牛血清属于一种浅黄色澄清、无溶血、无异物，稍黏稠的液体，含有各种血浆蛋白、多肽、脂肪、碳水化合物、生长因子、激素、无机物等，这些物质对促进细胞的生长或抑制生长活性起到生理平衡作用。在进行细胞培养时，必须确保新生牛血清的质量，基于牛血清的相关成分，要明确其对细胞所产生的影响。其中，结合动物血清的应用状况，以新生牛血清较为常见，它可以在组织培养、细胞培养中发挥重要作用[2]。
在医学科学研究不断进步的前提下，对细胞培养所用的血清质量提出了更为严格的要求，实践阶段更加重视相应材料的质量标准，遵循《中华人民共和国药典》通则3604 新生牛血清检测要求。在对新生牛血清检测期间，要关注pH、渗透压、摩尔浓度、蛋白质含量、血红蛋白、细菌内毒素等方面的检查，基于《中华人民共和国兽药典》(简称《中国兽药典》)中“新生牛血清”规定，pH 在7.00～8.50、渗透压在250～330 mOsmol/kg、总蛋白含量在35～50 g/L、血红蛋白≤200 mg/L、内毒素≤10 EU/mL；
在实施无菌检测、支原体检测时，需满足阴性标准；
执行病毒检测时，不得检出牛病毒性腹泻病毒(bovine viral diarrhea virus，BVDV)、牛腺病毒(bovine adenovrus，BAV)、牛细小病毒(bovine parvovirus，BPV)、牛副流感病毒3 型(bovine parainfluenza virus type 3，BPIV3)、牛呼肠病毒(bovine reoviruses，BReV)、牛轮状病毒(bovine rotavirus，BRV)[3]。此外，新生牛血清能够为细胞增殖提供养分，在诊断试剂方面也有用武之地，例如，针对近些年来出现的非洲猪瘟病毒、新型冠状病毒等，可以为对应病毒的各类体外诊断试剂盒生产提供帮助。需要注意的是，针对国内外牛血清的质量标准，在实际应用期间存在差异，国内外牛血清质量标准对比见表1。
基于“全国新生牛血清质量管理研讨会”的会议精神，相关管理部门明确了我国牛血清生产企业的现状和未来的发展要求，并对《全国牛血清生产企业达标检查手册》进行修订。调查发现，当前市场上应用到的新生牛血清来源并不固定，质量也处于参差不齐的状态，加上不同批次的质量、检测方法等存在明显的差异，均会对动物疫苗的生产质量带来严重影响[4]。在较为严重的情况下，甚至会由于产品污染、质量不佳而导致实验不合格，会极大程度上增加生产成本，对动物疫苗质量构成威胁。因此，有效控制新生牛血清的质量、保证应用效果已经成为解决动物疫苗安全问题的关键。
2.1 新生牛血清的来源广泛且质量差异大
结合应用状况，发现现阶段使用的新生牛血清主要来自农场或者奶牛场淘汰的公牛牛犊，受限于地域环境、采集时间、采集方法等，最终获得的新生牛血清质量存在较大差别[5]。即使是同一农场，每头牛的健康状况也并不相同，在缺乏健康诊断及健康追溯的条件下，难以保证新生牛血清的质量。此外，针对新生牛血清供应、采集多应用“初制血清”，对应的地点、范围并不固定，这在某种程度上表明国家监管部门很难对其实施统一化管理，增大了血清采集规范化执行的难度。另外，新生牛血清原料的供应商整体上暴露出杂、乱、差的特点，并且缺乏严谨的质量控制、监测等作为支持，加上生产人员技术能力不足、设备配置简单等，均会对质量控制造成负面干扰。
2.2 新生牛血清的生产质量控制难度较大
第一，生产方式落后且操作不规范。整个过程较为粗放，所用设施设备较为简单，也难以保证该区域环境的整洁度。即使在采用自动灌装的条件下，也可能导致新生牛血清被微生物所污染。第二，新生牛血清的批次差异大。由于其采集源头较为广泛，并且获得的血清成分明显存在差别，不同批次甚至是相同批次的血清所具有的特征也具有误差，其最终能够维持或促进细胞生长的效果存在差异。有时，生产厂家为了提高利润，可能会将不同批次的血清简单混合，这也会呈现出血清质量存在明显差异的状况，增大了对动物疫苗生产质量控制的难度。第三，有关新生牛血清质量检验项目并不完善。针对牛血清供应的厂家而言，其中不乏有小型企业，这些企业没有过硬的实力，配备的检测设备并不完善，且很难控制新生牛血清的源头质量。第四，传染源的检测手段相对落后。由于对传染源的检测方式偏于落后，导致牛血清的供应商很难及时诊断出血清中是否存在相关的病毒性抗体，这也对后期动物疫苗生产带来隐患。第五，偶然存在的造假情况。在涉及到经济效益时，有些商家为了降低对应的生产成本，不惜采用以次充好的手段，这也明显降低了新生牛血清的质量。同时，在实际使用期间，还可能存在相应标签和质量不符合的状况。
2.3 使用新生牛血清时缺乏对供应商进行管理与检测
第一，在采购新生牛血清时，部分企业更加注重从价格的低廉性出发，通常会对质量有所忽视。涉及到对供应商的检测与控制时，主要停留在早期阶段的物料检验过程，未曾对生产期间的质量加以控制。在具体实践期间，很难及时、精确地掌握对应厂家的血清采集过程，甚至包括源头、生产质量监测都未曾进行了解与监督，对相关物料的质量管理表现为被动性特点[6]。第二，当前企业会按照《中华人民共和国生物制品原辅料质量标准规程》来执行，但涉及到的对应质量标准属于质控的最低标准，如果企业直接将其视作依据，就可能会出现新生牛血清管理质量不严格的问题，这也反映出企业可能存在缺乏完善性内控质量标准的情况。第三，部分新生牛血清的检测周期较长，有关检测项目较为复杂，导致成本偏高。因此，企业为了降低所需费用，就可能会故意减少需检测的项目，在此条件下，就难以满足检测的完善性需求，无法对关键环节实施严密把控。
3.1 提升行业监管力度，保证新生牛血清的生产、销售及使用均满足规范
在具体操作中，需要加强对新生牛血清的生产管理，从系统化、规范化建设方面出发，保证监管控制的合理性与有效性。同时，维持好新生牛血清市场，在经过全面检查且满足最终的资格条件后，才能向其发放对应的资格认证书。最终，生产新生牛血清的厂家只有获得相应的生产许可证、产品文号以后才有资格实施对新生牛血清的采集、生产与销售。
3.2 积极提高对新生牛血清采集源头的质量管控
从源头层面出发，重视对新生牛血清采集源头的控制，对采集地点、范围等予以确定，并按照相应法律法规要求，确保该采集区已经过兽药监管部门的登记与审核，并满足批准采集实施条件。同时，在对新生牛犊进行血清采集前，还需要经过健康统计与追溯调查，结合专业兽医实施卫生检疫的结果，最终判断其是否满足条件。只有上述条件均满足，并经过完善化的检疫流程、获得相应的检测结果后，才具备提供新生牛血清的条件。
3.3 严格落实新生牛血清的质量管理控制标准
研究发现，针对生产新生牛血清的厂家依旧存在未曾准确执行新生牛血清质控标准的情况，在具体操作过程中，为了尽可能降低成本，有时甚至可能省略部分项目的检查，这必然会增加新生牛血清质量安全风险。因此，为了避免上述现象的发生，需要加强对其质量的监督，并制定出明确的处罚规定。在执行期间，以《中国生物制品规程》《中国生物制品主要原辅材料质控标准》为依据，加强对新生牛血清的质量管控。从国家层面出发，则应提升行业的监管力度，严格按照操作规范去落实对新生牛血清生产过程的监督与检测。此外，在对新生牛血清展开研究时，要从其血清成分、是否存在病毒等方面出发，保证研究过程更为深入，不断提升新生牛血清的质量，使其满足国家质控标准要求。根据国内牛血清的质量标准，依据《中华人民共和国药典》三部(2020 版)通则(3604 新生牛血清检测要求)，对胎牛血清质量标准主要参考第九版《欧洲药典》(EP 9.0)和《美国药典》(USP 40)胎牛血清相关规定。在对牛血清进行检测期间，包括以下项目：①理化检测；
②微生物检测(细菌、真菌、支原体、噬菌体)；
③病毒检测；
④细胞增殖检测，保障血清品质[7]。以牛血清中的常见病毒为例，其检测项目见表2。
3.4 科学构建供应商审核机制、规范对血清供应商的质量管控
对使用新生牛血清的企业而言，则结合企业实际情况，科学建立起更为严格的供应商管理机制，确保在选择新生牛血清时做到有据可依。第一，在选择和确定新生牛血清供应商时，要确保物料采购、生产部门、质量管理部门人员共同参与，完成筛选与审核。在对血清供应商进行审查时，从企业的生产能力、质量管理、人员配置、物料管理等多方面出发，保证该供应商足够可靠且具备相关资质，并尽可能与之建立起长久性的合作关系。第二，在确定好供应商后，还需提前对相关样品实施检验和试用。通常来讲，企业可向新生牛血清生产厂家获取不同批次的样品，用以检验上述血清是否满足质量标准，并依据最终的试用结果决定是否采购。第三，使用企业可优先向牛血清供应商提供自身所需标准，正常状态下，企业自身使用的牛血清质量甚至要超过国家规定的标准，为了保证生产出来的新生牛血清满足使用要求，应控制检测、包装储存、运转等各个流程的质量，积极消除生产及运送过程中存在的隐患。第四，对新生牛血清的生产厂家实施定期或者不定期的检查，通过前往现场对工作环境进行监督考察，了解生产企业的质量保障体系，观察生产记录、质量标准是否按照规范执行，掌握客户反馈意见的处理结果，并结合上述内容予以综合性评估，以便实现优选供应商、确定合理的采购比例。
3.5 建立健全血清质量监测项目、保证检验流程的完善性
为了确保供动物疫苗生产所用的新生牛血清能够满足标准，要积极建立健全的血清质量监测项目，在操作期间严格遵从兽药GMP 的相关规定，确保随机抽样达到标准[8]。另外，从企业内部而言，还应当建立起内控质量标准，保证各检测项目足够完善。基于新生牛血清的检验，主要涉及到蛋白质含量、支原体、大肠杆菌等方面的检测，并确保其拥有支持细胞增殖的能力。针对上述不同项目，可按照随机抽样方法分别检查，不断提高检测水平并确保检验的规范性。此外，针对已放置一定时间的新生牛血清，在使用前通常要进行综合性判断，例如，先从外观来判断是否出现较多沉淀、血清过于浑浊等情况，若存在上述情况就应舍弃。若外观检测没有问题，则还需要实施蛋白质变性检测、振荡后观察液体变化等，有效确保检验流程的完善性，为动物疫苗生产提供安全支持。
综上所述，在明确新生牛血清的重要性后，为了强化其质量控制，可以采用提升行业监管力度，保证新生牛血清的生产、销售及使用均能够满足规范，积极提高对新生牛血清采集源头的质量管控，严格落实新生牛血清的质量管理控制标准，科学构建供应商审核机制、规范对血清供应商的质量管控，建立健全的血清质量监测项目、保证检验流程的完善性等方法，充分确保新生牛血清质量满足要求，为动物疫苗生产带来帮助。
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