摘要 目的：考察核黄素磷酸钠注射液细菌内毒素检查方法。方法：按《中国药典》2005年版二部，制定本品细菌内毒素限值，并研究核黄素磷酸钠注射液对细菌内毒素检查试验的干扰情况，以确定本品是否适用细菌内毒素检查法。结论：本品可采用细菌内毒素检查法，并建立了本品细菌内毒素检查法质量标准。
关键词 核黄素磷酸钠注射液 细菌内毒素检查法 干扰试验
中图分类号：R927 文献标识码：A
核黄素磷酸钠注射液是维生素类药，用于口角炎、唇炎、舌炎、眼结膜炎及阴囊炎等疾病的治疗。其疗效确切，副作用少。而《中国药典》2005年版二部收载的该品种此项检查未列入标准中。
1 实验材料
1.1 试药
核黄素磷酸钠注射液，规格：2ml：10mg，批号：20050808、20050809、20050810，南京新百药业有限公司。
1.2 仪器
ZH- 2型自动漩涡混合器，天津药典标准仪器厂生产；电子恒温水浴锅，天津市泰斯特仪器有限公司生产，200 l移液器，1000 l移液器，无热原吸头，1.5�？5cm长试管，镊子等（均180℃干烤3小时）。
2 方法和结果
2.1 供试品内毒素限值（L）的确定
根据《中国药典》2005年版二部附录ⅪⅩ F细菌内毒素检查法应用指导原则，限值L=K/M， K为按规定的给药途径，人用每公斤体重每小时最大可接受的内毒素剂量，非肠道给药的注射液的K=5EU/（kg·h），M为人用每公斤体重每小时最大剂量，参照核黄素磷酸钠注射液使用说明书单次最大使用剂量为20ml，即100mg，所以M为0.333ml·kg-1·h-1，计算细菌内毒素限值L=5.0/0.333=15EU·ml-1。
2.2 供试品干扰预试验
（1）计算供试品的最大有效稀释（MVD）：根据公式MVD =L/ = 60，将样品稀释60倍作为供试品溶液，此时对应的核黄素的浓度为0.083。计算当 = 0.25EU/ml时相应的MVD值如表1：
将上述稀释液记为NPC系列，同时在上述稀释液中添加标准内毒素溶液，使每一浓度试验溶液中含有2 浓度的细菌内毒素，记此系列浓度为PPC。
（2）加样及反应：NPC系列：各取批号050315和批号050717的 TAL10支，各加0.1ml BET水溶解，再各加上述稀释好的供试品0.1ml，每一供试品浓度做两反应管。
PPC系列：各取批号050315和批号051717的TAL10支，各加0.1ml BET水溶解，再各加0.1ml用先前稀释好的2 浓度CSE ，每一供试品浓度重复两反应管。其中NPC出现阳性或PPC出现阴性则表示有干扰影响。结果见表2。
试验结果表明，本品浓度在0.167 mg/ml以下时对两个厂家鲎试剂均无抑制作用。
2.3 干扰验证实验
用细菌内毒素检查用水以及浓度为0.083mg/ml的样品稀释液（取本品，加细菌内毒素检查用水稀释至0.083mg/ml，供用），采用两个厂家的TAL进行干扰试验，同时作样品阳性对照以及阴性对照，结果见表3。
试验结果表明，Es在0.5 ～2.0 之间（包括0.5 和2.0 ），且Et在0.5Es～2.0Es之间（包括0.5Es和2.0Es），根据《中国药典》2005年版二部附录XI E中干扰试验的结果判断，故认为浓度为0.083mg/ml的样品稀释液无干扰作用。
3 供试品细菌内毒素检查
取3批供试品，按《中国药典》2005年版二部附录Ⅺ E细菌内毒素检查法。结果见表4，三批供试品内毒素含量均小于15 EU/ml，符合拟定的标准规定。
4 讨论
本实验采用两个厂家的鲎试剂，研究了3批核黄素磷酸钠注射液对细菌内毒素检查的干扰情况，结果表明，供试品在0.167mg/ml浓度时对试验无干扰作用，本品可以采用细菌内毒素检查法控制其质量。
参考文献
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