【摘要】 目的:建立高效液相色谱法测定清肺止咳合剂中黄芩苷的含量。方法:高效液相色谱法:色谱柱以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂;以甲醇-水-磷酸(47:53:0.2)为流动相;检测波长为280 nm。结果:在0.2~1 μg范围内黄芩苷峰面积与进样量线性关系良好,r=0.9999;样品加样回收率为100.20%(n=5),RSD 0.71%。结论:所建立的方法准确可行,重复性好,可有效控制清肺止咳合剂的质量。
【关键词】 高效液相色谱法; 清肺止咳合剂; 黄芩苷; 含量测定
Determination of Baicalin in Qingfeizhike Mixture by HPLC/ZHANG Xiao-ping, ZHOU Hong-he. //Medical Innovation of China,2012,9(33):149-150
【Abstract】 Objective: To establish a method to determine baicalin in Qingfeizhike Mixture by HPLC. Method: Baicalin intablets were separated by HPLC on Cosmosil C18 column with methanol-water-phosphorie acid(47:53:0.2)ad mobile phase and detection wavelength was set at 280 nm. Result: The paeontflorin area and content showed a good linear relationship ym the range of 0.2~1 μg and correlation coefficient was 0.9999. The average recovery of the added sample was 100.20%(n=5), RSD 0.71%. Conclusion: The method is stable, accurate, and precise for the quality control of Qingfeizhike Mixture.
【Key words】 HPLC; Qingfeizhike Mixture; Baicalin; Determination
First-author’s address: Jinan City Chinese Medicine Hospital, Jinan 250012, China
doi:10.3969/j.issn.1674-4985.2012.33.095
清肺止咳合剂是由省级食品药品监管部门批准的医院制剂,由炙麻黄、黄芩、炒杏仁、桑叶、川贝母等十六味药物组成。具有清热止咳、化痰平喘功效,用于风热肺热引起的支气管炎肺炎见咳嗽痰多等症,具有较好的临床疗效。原质量标准中没有含量测定,为提高本制剂的质量控制标准,通过以黄芩苷为指标,对本制剂三批样品中的黄芩进行了含量测定研究,并进行了方法学的系统考察,建立了黄芩苷的含量测定方法,提高了其质量标准水平。
1 仪器与试药
1.1 仪器 日本岛津(LC-20A)高效液相色谱仪;Prominence SPD-M20A PDA检测器。
1.2 试药 黄芩苷对照品,批号:110715-201016,由中国食品药品检定研究院提供。试剂为色谱纯;清肺止咳合剂,自制,批号:20120122、20120123、20120126。
2 方法与结果
2.1 色谱条件与系统适用性试验 填充剂为十八烷基硅烷键合硅胶,柱温38 ℃,检测波长280 nm,流动相:甲醇-水-磷酸(47:53:0.2),流量1 ml/min,进样量10 μl。理论板数按黄芩苷峰计算,应不低于3000。
2.2 对照品溶液的制备 精密称取黄芩苷对照品适量,以甲醇为溶剂,制成每1 ml含100 μg的溶液。
2.3 供试品溶液的制备 精密量取清肺止咳合剂1 ml,置50 ml容量瓶中,加70%乙醇溶液35 ml,超声处理20 min,放置至室温,加70%乙醇溶液至刻度,摇匀,静置,滤过,弃去初滤液,续滤液作为供试品溶液。
2.4 空白对照溶液的制备 按本制剂的处方量,制备缺黄芩的对照液,按供试品溶液的制备方法制成空白对照溶液。
2.5 空白试验 分别取上述黄芩苷对照品、供试品溶液、阴性空白对照溶液各10 μl,注入液相色谱仪,记录色谱图(见图1-3)。结果表明,在黄芩苷峰位置处,空白对照溶液没有其他峰呈现,说明空白对照无干扰,符合测定要求。
图1 黄芩苷对照品
图2 空白对照样品
图3 样品
2.6 线性关系考察 精密吸取黄芩苷对照品2、4、6、8、10 μl,分别注入液相色谱仪,按上述色谱条件测定,以进样量为横坐标,峰面积为纵坐标,绘制标准曲线,得回归方程为Y=0.1306X-0.053,r=0.9998。在0.2~1 μg范围内有良好线性。
2.7 精密度试验 取黄芩苷对照品溶液,重复进样6次,每次10 μl,按上述色谱条件测定峰面积,RSD=0.41,证明仪器有良好的精密度。
2.8 稳定性试验 试验结果表明供试品与对照品在12 h内均稳定。方法:取对照品溶液和供试品溶液分别每隔2小时进样1次,共进样6次,每次10 μl,记录色谱图。RSD分别是0.56,0.63。
2.9 重复性试验 取样品(批号:20120122)平行制备6份供试品溶液,按上述色谱条件测定峰面积,并计算含量,结果表明有良好重复性,RSD=0.42。
2.10 加样回收试验 取已知含量的样品适量,精密量取5份,分别加入一定量的黄芩苷对照品,制备成供试品溶液,测定峰面积,计算黄芩苷的回收率。结果见表1。
2.11 样品测定 取样品3批,分别制成供试品溶液,精密吸取供试品溶液与对照品溶液各10 μl,按上述色谱条件测定峰面积(n=5),计算样品中黄芩苷的含量。结果见表2。
表2 样品中黄芩苷含量
批号 黄芩苷含量(mg/ml) RSD(%)
20120122 7.20 0.50
20120123 7.08 0.61
20120126 7.26 0.65
3 讨论
3.1 检测波长的选择,参考《中国药典》2010年版一部黄芩项下含量测定方法[1],取上述黄芩苷对照品溶液,在紫外分光光度计上于波长200~400 nm处扫描,结果在(280±2)nm波长处有最大吸收,故以280 nm为检测波长。
3.2 供试品溶液制备曾将加70%乙醇稀释后直接测定黄芩苷含量与加70%乙醇超声处理后测定加以比对,结果表明,加70%乙醇超声处理后黄芩苷含量高于稀释后直接测定,故本文采用加70%乙醇后超声处理供试品[2-3]。
参考文献
[1] 国家药典委员会.中国药典.一部[S].北京:中国医药科技出版社,2010:282.
[2] 宿洁,孙立华,李成果.高效液相色谱法测定利胆排石合剂中黄芩苷的含量[J].山东医药工业,2002,21(5):12.
[3] 李卓,危当恒.咽喉炎合剂中黄芩苷的稳定性考察[J].中国药房,2008,19(36):2845.
(收稿日期:2012-09-13) (本文编辑:王宇)